破骨细胞的形成是通过破骨前体细胞的融合而成的多核巨细胞，因此细胞的密度在这一过程中至关重要。人类破骨细胞的体外诱导通常依赖于高纯度的单核细胞。这些细胞在诱导分化的过程中不会增殖，从而保持了可控的细胞密度，并提升了诱导的成功率。相比之下，针对小鼠的破骨细胞诱导，通常选择骨髓细胞，但由于骨髓中杂细胞的干扰，可能会阻碍细胞之间的融合。同时，初期扩增过程中的细胞生长速度差异，会导致细胞密度的不稳定，从而影响最终的融合效果，可能导致诱导分化的失败。

新葡萄8883官网AMG提供的高品质细胞培养产品能够显著提升破骨细胞的分化效率。以下是小鼠骨髓细胞的获取与破骨细胞的诱导分化步骤：

1. 小鼠骨髓细胞的获得

1.1. 材料处理：对6-8周龄的小鼠施行颈椎脱臼法处死后，将其浸泡在酒精中进行消毒。手术过程中，在超净台内小心取出所有胫骨和股骨，并尽量去除骨周围的肌肉组织。

1.2. 清洗及培养：将取出的骨头放入无菌PBS培养皿，清洗后转移至新的无菌PBS培养皿。

1.3. 骨髓提取：剪去骨的两端，利用注射器向骨髓腔内注入PBS进行反复冲洗，直至骨髓完全变白。

1.4. 筛分与离心：收集骨髓悬液，通过筛网过滤去掉小碎片和肌肉组织，然后进行离心以获得沉淀，进一步清洗细胞。

1.5. 细胞重悬：将清洗后的沉淀用完全培养基（α-MEM培养基 + 10% FBS + 双抗）重悬，即可获得小鼠骨髓细胞。

2. 巨噬细胞诱导分化

2.1. 细胞处理：将重悬的细胞调整至1-2 x 10⁶/ml，加入终浓度为30 ng/ml的小鼠M-CSF，按比例将细胞悬液铺入10cm的细胞培养皿中，培养5天，直至细胞生长至80-90%贴壁状态。

2.2. 消化细胞：弃去培养基，用PBS清洗一次，加入胰酶在37℃消化，待细胞变松散后加入血清终止消化，并收集细胞进行离心。

3. 破骨细胞诱导分化

3.1. 诱导培养基配置：用诱导分化培养基（完全培养基 + 30 ng/ml Murine M-CSF + 50 ng/ml Murine RANKL）重悬细胞。

3.2. 细胞与体积比例：按照指定的细胞数和对应的体积进行铺入。

3.3. 培养及观测：培养分化3-5天，每天更换培养基，第三天可以观察到细胞融合情况，多个核细胞形成。在融合后，需及时观察细胞状态，以便于选择最佳时机终止分化并进行后续实验。

请注意，订购的细胞因子应按说明书进行溶解和稀释，避免多次冻融，如需诱导分化培养基，依据实际需要现场配置，以确保培养效果。

通过使用新葡萄8883官网AMG的高品质细胞培养介质，能够加强破骨细胞的诱导分化效果，提高实验的成功率与准确性，为生物医学研究提供可靠的支持与保障。