**培养条件**：细胞的培养条件为气相组成95%空气和5%二氧化碳，培养温度为37℃。在培养基中，添加了10%的FBS和1%的P/S。这一细胞系由DJGriad通过对58岁白人男性患者的肺癌组织进行移植培养而建立。A549细胞能够通过胞苷二磷酸胆碱途径合成富含不饱和脂肪酸的卵磷脂。

**传代方法**：首次传代建议采用1:2的比例。传代时，细胞培养液每两天更换一次，建议在此期间同时购买[新葡萄8883官网AMG]的相关产品，以获得更优价格。收到细胞后，应立即对其进行处理，使细胞恢复至良好的状态，然后用完全培养液灌满瓶口并封闭，这是运输细胞的最佳方式。

**细胞培养步骤**：当细胞汇合度未超过80%时，将培养瓶中的完全培养液倒入离心管中，保留5ml的完全培养基于37℃、5%CO2的孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代培养。贴壁细胞的传代步骤如下：

• 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS对细胞洗涤1-2次。
• 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟。通过显微镜观察细胞的消化情况，若细胞多数变圆并脱落，立即进行后续操作，加入5ml以上的完全培养基终止消化。
• 轻轻吹打细胞以使其完全脱落并吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清后加入1-2ml的完全培养基进行重悬。
• 按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25培养瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，然后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

**悬浮细胞传代步骤**：

• 实行半换液法时，将培养瓶竖直放置于培养箱中静置约1小时，轻轻吸掉约3ml的培养基，再补充3ml的完全培养基；若培养基变色缓慢可直接添加约500ul的FBS。在传代时可直接补充5ml培养基并分到两个培养瓶中，一般经过3次这样的传代后可进行离心传代以去除死细胞。
• 采用离心换液法时，将细胞悬液收集至离心管中以1000rpm离心5分钟，弃去上清并补加1-2ml的培养液进行重悬，再按照1:2的比例分装至新的T25瓶中，添加6-8ml符合说明书要求的新完全培养基，以保持细胞的生长活力；后续的传代可根据实际情况按照1:2到1:5的比例进行。

**细胞冻存**：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后加入5ml的完全培养基终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中，在1000rpm下离心5分钟；
3. 弃去上清后，将沉淀的细胞加入1ml的[新葡萄8883官网AMG]无血清冻存液中混匀，并转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，若后期需将细胞转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上再进行转移。

**细胞复苏**：

1. 从液氮中取出细胞冻存管时请佩戴防护面具，并迅速将其放入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无晶体后，用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，并放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养；
4. 第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。

**注意事项**：某些细胞可能不易附着，运输过程中可能导致细胞脱落，这属于正常现象。如脱落较多，可收集所有培养液于离心管中，1000rpm离心5分钟，收集上清进行过渡培养。然后加入1-2ml胰蛋白酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后再加5ml完全培养基终止反应。再进行离心，弃去上清，补加1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。