本试剂盒仅限于科学研究用途,严禁用于医学诊断。人P53 (P53) Elisa试剂盒的检测原理为双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预先包被的adropin(AD)抗体微孔中,依次加入样本、标准品和HRP标记的检测抗体,经过适温培养和彻底洗涤后,用底物TMB显色。在过氧化物酶的催化下,TMB转变为蓝色,后在酸的作用下最终呈现黄色。显色强度与样品中adropin(AD)的浓度呈正相关。使用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)以计算样品浓度。
样品收集、处理和保存方法如下:1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,并在操作过程中避免细胞刺激。采血后以3000转离心10分钟迅速分离血清与红细胞;2. 血浆:使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝,然后以3000转离心30分钟取上清;3. 细胞上清液:以3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物;4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水,捣碎后以3000转离心10分钟取上清;5. 保存:如在样本收集后未能及时检测,应按一次用量分装并冻存于-20℃,避免反复冻融,解冻时需确保样品均匀充分解冻。
操作时须准备如下物品:试剂盒组成详细信息。注意:标准品(S0-S5)的浓度依次为:0、25、50、100、200、400 pg/mL。试剂准备时,将20×洗涤缓冲液按照1:20的比例稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。洗板方法以及操作步骤请遵循相应指南。
结果判断可通过绘制标准曲线实现。在Excel中将标准品浓度设为横坐标,相应的OD值设为纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,并按曲线方程计算各样本浓度值。请注意,此试剂盒的性能在使用时免责声明。
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