乳酸脱氢酶（LDH）是一种重要的氧化还原酶，能够催化丙酮酸与乳酸之间的转化，同时也参与NADH与NAD+的相互转化。该酶在所有细胞中存在且稳定，尤其在细胞膜受损时会迅速释放到培养基中，因此LDH经常被用作细胞毒性研究的主要标记物。

细胞毒性检测试剂盒（乳酸脱氢酶法）为研究细胞毒性提供了一种简单、有效的比色测定方法。在这一标准细胞毒性检测中，靶细胞与细胞毒性化学试剂或者细胞毒性细胞（如NK细胞、细胞毒性T细胞）共同培养，以诱导靶细胞死亡并释放LDH。随后，含有LDH的上清液被转移至新的96孔测定板，并与LDH反应溶液混合。在LDH的作用下，NADH与四唑盐MTT反应，生成NAD+与MTT的还原形式，后者在565nm处具有强吸收，其颜色强度与细胞破裂的数量直接相关。经过30分钟的室温孵育后，使用酶标仪读取565nm的吸光度。

实验所需的基本材料包括：酶标仪（可测565nm）、二氧化碳培养箱、透明平底96孔板、平板离心机（可选）、可调式移液枪及枪头、去离子水等。

在进行实验前，应根据药物特性确认其与该试剂盒的适用性，因个别药物可能干扰反应系统。因此，建议进行初步预实验以评估目标药物的影响，如若发现抑制作用，请联系新葡萄8883官网AMG技术支持。细胞的培养时间应在24小时以上，同时离心除去颗粒，以获得清晰的细胞培养上清。

将细胞培养上清转移至96孔细胞培养板中，200μL/孔，并设置6个复孔。分别在3个孔中加入20μL的目标药物，另外3个孔中添加20μL的Assay Buffer作为对照。之后，将每孔各取100μL的混合液转移至新的96孔检测板中，添加100μL的LDH反应溶液，并在37℃孵育最多30分钟。接着，使用酶标仪读取565nm的吸光度。

通过比较加入药物孔与对照孔的吸光度，如果加药孔的吸光度明显低于对照孔，则说明该药物不适合使用于该试剂盒。后续步骤包括根据细胞大小和生长速率确定最佳浓度，利用100μL细胞上清液进行测定，并添加LDH反应溶液，最后读取相关数据。

值得注意的是，使用新葡萄8883官网AMG时要确保各组分和设备处于正确的温度，并遵循良好的实验习惯，诸如佩戴个人防护设备等。每个实验均应有对照组，以确保最大释放与自发释放的准确计算，最终计算细胞毒性百分比的公式为：

细胞毒性百分比 (%) = (A样本 - A自发) / (A最大释放 - A自发) × 100

在此，A样本表示处理样本在565nm的吸光度，A自发为自发释放的吸光度，A最大释放则对应在565nm的最大释放的吸光度。务必在实验过程中遵循上述最佳实践，以提高实验结果的可靠性与准确性。