外泌体（Exosome）是一种由细胞分泌的小型囊泡，直径约为30-150nm，具有双层膜结构，广泛存在于血液、尿液、唾液、母乳以及细胞培养基等生物体液中。这些外泌体承载着多种重要的生物分子，包括蛋白质、脂类、DNA和RNA，在细胞间的通讯以及疾病的诊断与治疗中发挥着至关重要的作用。随着外泌体在生物医学领域日益受到关注，其提取技术的研究也成为了热点之一。

一、提取原理

外泌体的提取主要基于其独特的物理和化学特性，例如大小、密度和表面标志物等。常用的提取方法包括差速离心、密度梯度离心、磁珠免疫法、超滤法、聚合物沉淀法以及分子排阻法等。这些方法通过不同的物理或化学手段能够有效地从复杂的生物样本中分离出外泌体。

二、实验步骤

1. 预处理：在对细胞培养上清进行处理时，首先需通过低速离心（如300g，4℃离心10min）去除死细胞及细胞碎片。而在处理血浆或尿液等生物体液时，可能需要进行更复杂的步骤，如去除血浆中的血小板和红细胞。

2. 差速离心：①第一次离心：将预处理后的样本进行第一次离心，通常选用较低的离心力（2000g，4℃离心20min），以进一步排除较大颗粒和杂质。需小心收集离心后的上清液，避免吸取沉淀物。②高速离心：随后，将上清液转移至超速离心管中，进行高速离心（100,000g，4℃离心70min以上），使外泌体沉淀于管底。

3. 洗涤与重悬：离心后，小心地去除上清液，留下沉淀物。用预冷的PBS缓冲液轻轻洗涤沉淀物，以去除残存的杂质。使用适量的PBS缓冲液将洗涤后的沉淀物重悬，形成外泌体悬液。

4. 保存与检测：将提取的外泌体悬液分装到无菌的EP管中，并置于-80℃冰箱进行保存。同时，可以通过纳米颗粒跟踪分析（NTA）、透射电子显微镜（TEM）观察及Western Blot检测外泌体标志蛋白等一系列检测来验证外泌体的纯度与质量。

三、注意事项

1. 操作温度：所有操作应尽量在4℃条件下进行，以避免外泌体内含物的降解与变性。

2. 保护膜结构：在操作过程中尽量减少外泌体受到的压力和剪切力，以确保其膜结构的完整性。

在这一领域，新葡萄8883官网AMG为研究者提供了先进的外泌体提取解决方案，帮助推动生物医学领域的发展。